amidaasi (AMD)
Entsyymit:Ovat makromolekyylibiologisia katalyyttejä, useimmat entsyymit ovat proteiineja
Amidaasi:Katalysoi erilaisten endogeenisten ja vieraiden alifaattisten ja aromaattisten amidien hydrolyysiä siirtämällä asyyliryhmä veteen tuottaen vapaita happoja ja ammoniakkia.Hydroksaamihappoja ja muita orgaanisia happoja käytetään laajalti lääkkeinä, koska ne ovat kasvutekijöiden, antibioottien ja kasvainten estäjien ainesosia.Amidaasit voidaan jakaa R-tyypin ja S-tyypin asylaaseihin katalyytin stereoselektiivisyyden mukaan.
Sen lisäksi, että amidaasi katalysoi amidien hydrolyysiä, se voi myös katalysoida asyylinsiirtoreaktioita kosubstraattien, kuten hydroksyyliamiinin, läsnä ollessa.
Eri lähteistä peräisin oleva amidaasilla on erilainen substraattispesifisyys, osa niistä voi vain hydrolysoida aromaattisia amideja, osa vain alifaattisia amideja ja osa hydrolysoida α- tai ω-aminoamideja.Useimmilla amiineilla on hyvä katalyyttinen aktiivisuus vain asyklisille tai yksinkertaisille aromaattisille amideille, mutta monimutkaisille aromaattisille amideille heterosykliset amidit, erityisesti amidit, joissa on orto-substituentteja, ovat yleensä vähäisiä (vain muutamilla entsyymeillä on parempia katalyyttisiä vaikutuksia).
Katalyyttinen mekanismi:
| Entsyymit | Tuotekoodi | Tuotekoodi |
| Entsyymijauhe | ES-AMD-101~ ES-AMD-119 | sarja 19 amidaasia, 50 mg kukin 19 tuotetta * 50 mg / tuote tai muu määrä |
| Screening Kit (SynKit) | ES-AMD-1900 | sarja 19 amidaasia, 1 mg kukin 19 tuotetta * 1 mg / tuote |
★ Korkea substraattispesifisyys.
★ Vahva kiraalinen selektiivisyys.
★ Korkea muunnostehokkuus.
★ Vähemmän sivutuotteita.
★ Lievät reaktioolosuhteet.
★ Ympäristöystävällinen.
➢ Entsyymiseulonta tulisi suorittaa tietyille substraateille substraattispesifisyyden vuoksi ja saada entsyymi, joka katalysoi kohdesubstraattia parhaalla katalyyttisellä vaikutuksella.
➢ Älä koskaan kosketa ääriolosuhteisiin, kuten korkeaan lämpötilaan, korkeaan/matalaan pH-arvoon ja korkean pitoisuuden orgaaniseen liuottimeen.
➢ Normaalisti reaktiojärjestelmän tulisi sisältää substraattia, puskuriliuosta (entsyymin optimaalinen reaktio-pH).Ko-substraattien, kuten hydroksyyliamiinin, tulisi olla läsnä asyylinsiirtoreaktiojärjestelmässä.
➢ AMD tulee lisätä viimeisenä reaktiojärjestelmään optimaalisella reaktion pH:lla ja lämpötilalla.
➢ Kaikilla AMD:illä on erilaisia optimaalisia reaktio-olosuhteita, joten jokaista niistä tulisi tutkia tarkemmin erikseen.
Esimerkki 1(1):
Hydrolyysiaktiivisuus erilaisiin amidisubstraatteihin
| Substraatti | Erityinen toiminta μmols min-1mg-1 | Substraatti | Erityinen toiminta μmols min-1mg-1 |
| Asetamidi | 3.8 | ο-OH-bentsamidi | 1.4 |
| Propionamidi | 3.9 | p-OH-bentsamidi | 1.2 |
| Laktamidi | 12.8 | ο-NH2bentsamidi | 1.0 |
| butyramidi | 11.9 | p-NH2bentsamidi | 0.8 |
| Isobutyramidi | 26.2 | ο-Toluamidi | 0.3 |
| Pentanamidi | 22.0 | p-Toluamidi | 8.1 |
| Heksanamidi | 6.4 | Nikotiiniamidi | 1.7 |
| Sykloheksaanamidi | 19.5 | Isonikotiiniamidi | 1.8 |
| Akryyliamidi | 10.2 | pikoliiniamidi | 2.1 |
| Metakryyliamidi | 3.5 | 3-fenyylipropionamidi | 7.6 |
| Prolinamidi | 3.4 | Indol-3-asetamidi | 1.9 |
| Bentsamidi | 6.8 |
Reaktio suoritettiin 50 mM natriumfosfaattipuskuriliuoksessa, pH 7,5, 70 °C:ssa.
| amidit | Hydroksyyliamiini | Hydratsiini |
| Asetamidi | 8.4 | 1.4 |
| Propionamidi | 18.4 | 3.0 |
| Isobutyramidi | 25.0 | 22.7 |
| Bentsamidi | 9.2 | 6.1 |
Reaktio suoritettiin 50 mM natriumfosfaattipuskuriliuoksessa, pH 7,5, 70 °C:ssa.
Reagenssikonsentraatio: amidit, 100 mM (bentsamidi, 10 mM);hydroksyyliamiini ja hydratsiini, 400 mM;entsyymi 0,9 µM.
Esimerkki 2(2):
Esimerkki 3(3):
1. D'Abusco AS, Ammendola S., et ai.Extremophiles, 2001, 5:183-192.
2. Guo FM, Wu JP, Yang LR, et ai.Process Biochemistry, 2015, 50(8): 1400-1404.
3. Zheng RC, Jin JQ, Wu ZM, et ai.Bioorganic Chemistry, 2017, saatavana verkossa 7.
