Amidaasi (AMD)
Entsyymit:Ovat makromolekyylisiä biologisia katalyyttejä, useimmat entsyymit ovat proteiineja
Amidaasi:Katalysoivat erilaisten endogeenisten ja vieraiden alifaattisten ja aromaattisten amidien hydrolyysiä siirtämällä asyyliryhmä veteen, jolloin muodostuu vapaita happoja ja ammoniakkia. Hydroksaamihappoja ja muita orgaanisia happoja käytetään laajalti lääkkeinä, koska ne ovat kasvutekijöiden, antibioottien ja kasvainten estäjien ainesosia. Amidaasit voidaan jakaa R- ja S-tyypin asylaaseihin katalyytin stereoselektiivisyyden mukaan.
Amidien hydrolyysin katalysoinnin lisäksi amidaasi voi myös katalysoida asyylinsiirtoreaktioita kosubstraattien, kuten hydroksyyliamiinin, läsnä ollessa.
Eri lähteistä peräisin olevilla amidaaseilla on erilainen substraattispesifisyys. Jotkut niistä voivat hydrolysoida vain aromaattisia amideja, jotkut vain alifaattisia amideja ja jotkut hydrolysoivat α- tai ω-aminoamideja. Useimmilla amiineilla on hyvä katalyyttinen aktiivisuus vain asyklisille tai yksinkertaisille aromaattisille amideille, mutta monimutkaisille aromaattisille yhdisteille heterosykliset amidit, erityisesti orto-substituentteja sisältävät amidit, ovat yleensä heikosti aktiivisia (vain harvoilla entsyymeillä on parempia katalyyttisiä vaikutuksia).
Katalyyttinen mekanismi:
| Entsyymit | Tuotekoodi | Tuotekoodi |
| Entsyymijauhe | ES-AMD-101~ ES-AMD-119 | 19 amidaasin sarja, 50 mg kukin 19 kpl * 50 mg / kpl tai muu määrä |
| Seulontapakkaus (SynKit) | ES-AMD-1900 | 19 amidaasin sarja, 1 mg kukin 19 tuotetta * 1 mg / tuote |
★ Korkea substraattispesifisyys.
★ Vahva kiraalinen selektiivisyys.
★ Korkea muuntotehokkuus.
★ Vähemmän sivutuotteita.
★ Lievät reaktio-olosuhteet.
★ Ympäristöystävällinen.
➢ Entsyymiseulonta tulisi suorittaa tietyille substraateille substraattispesifisyyden vuoksi ja löytää entsyymi, joka katalysoi kohdesubstraattia parhaalla katalyyttisellä vaikutuksella.
➢ Älä koskaan kosketa äärimmäisiä olosuhteita, kuten korkeaa lämpötilaa, korkeaa/matalaa pH-arvoa ja suuria orgaanisten liuottimien pitoisuuksia.
➢ Normaalisti reaktiojärjestelmän tulisi sisältää substraattia ja puskuriliuosta (entsyymin optimaalinen reaktio-pH). Asyyliryhmien siirtoreaktiojärjestelmässä tulisi olla läsnä kosubstraatteja, kuten hydroksyyliamiinia.
➢ AMD tulee lisätä reaktiojärjestelmään viimeisenä optimaalisella reaktio-pH:lla ja -lämpötilalla.
➢ Kaikilla AMD-tyypeillä on erilaisia optimaalisia reaktio-olosuhteita, joten kutakin niistä tulisi tutkia erikseen.
Esimerkki 1(1):
Hydrolyysiaktiivisuus eri amidisubstraateille
| Alusta | Erityinen toiminta μmol min-1mg-1 | Alusta | Erityinen toiminta μmol min-1mg-1 |
| Asetamidi | 3.8 | ο-OH-bentsamidi | 1.4 |
| Propionamidi | 3.9 | p-OH-bentsamidi | 1.2 |
| Laktamidi | 12.8 | ο-NH2bentsamidi | 1.0 |
| Butyramidi | 11.9 | p-NH2bentsamidi | 0,8 |
| Isobutyramidi | 26.2 | ο-Toluamidi | 0,3 |
| Pentanamidi | 22.0 | p-Toluamidi | 8.1 |
| Heksaaniamidi | 6.4 | Nikotiiniamidi | 1.7 |
| Sykloheksanamidi | 19.5 | Isonikotinamidi | 1.8 |
| Akryyliamidi | 10.2 | Pikolinamidi | 2.1 |
| Metakryyliamidi | 3.5 | 3-fenyylipropionamidi | 7.6 |
| Prolinamidi | 3.4 | Indol-3-asetamidi | 1.9 |
| Bentsamidi | 6.8 |
Reaktio suoritettiin 50 mM natriumfosfaattipuskuriliuoksessa, pH 7,5, 70 °C:ssa.
| Amidit | Hydroksylamiini | Hydratsiini |
| Asetamidi | 8.4 | 1.4 |
| Propionamidi | 18.4 | 3.0 |
| Isobutyramidi | 25.0 | 22.7 |
| Bentsamidi | 9.2 | 6.1 |
Reaktio suoritettiin 50 mM natriumfosfaattipuskuriliuoksessa, pH 7,5, 70 °C:ssa.
Vastaavat reagenssipitoisuudet: amidit, 100 mM (bentsamidi, 10 mM); hydroksyyliamiini ja hydratsiini, 400 mM; entsyymi 0,9 μM.
Esimerkki 2(2):
Esimerkki 3(3):
1. D'Abusco AS, Ammendola S., et ai. Extremophiles, 2001, 5:183-192.
2. Guo FM, Wu JP, Yang LR ym. Prosessibiokemia, 2015, 50(8): 1400–1404.
3. Zheng RC, Jin JQ, Wu ZM ym. Bioorganic Chemistry, 2017, Saatavilla verkossa 7.
